同型半胱氨酸检测试剂-胱硫醚法
分类: 最上层  发布时间: 2018-03-24 13:13 

同型半胱氨酸检测试剂-胱硫醚法
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货号： Abt-P-62
供应商： 北京爱必信生物技术有限公司
英文名： HCY试剂
Hcy检测试剂OEM
（胱硫醚循环酶法，自主研发）
    双试剂液体同型半胱氨酸试剂是一种用来在体外定量检测人血清和血浆中总Hcy的试剂，该检测试剂有助于疑似患有高同型半胱氨酸血症、同型胱氨酸尿症病人的诊断和治疗。
Hcy是细胞内甲硫氨酸转甲基化过程中产生的一种含有巯基的氨基酸，Hcy经过循环被运输到血清中，血清中的Hcy多数以氧化形式与血清中的白蛋白通过二硫键的形式结合形成Hcy-蛋白复合物，只有少量的以游离型和二硫键连接的Hcy-SS-Hcy的形式存在。总Hcy是指以各种形式存在的、游离型和结合型Hcy的总和。同型半胱氨酸在代谢过程中形成半胱氨酸或蛋氨酸，在维生素B6的转硫基途径中，Hcy被不可逆转地分解为半胱氨酸，而大多数Hcy在叶酸和维生素B12依赖的蛋氨酸合成酶作用下重新形成甲硫氨酸。当这些反应出现异常时Hcy会不断累积并被分泌到血液中。浓度异常高的Hcy常被发现在患有Hcy尿症的受试者当中，Hcy尿症是Hcy代谢过程中一种罕见的酶紊乱的遗传疾病，患有该疾病的患者常表现为智力低下，早期动脉硬化，动脉和静脉血栓栓塞症，另外也发现其他不太严重的遗传缺陷患者的总同型半胱氨酸水平也会升高。
     流行病学研究表明Hcy水平的高低和心血管疾病有直接的联系， 27个这方面的偶联分析、包含超过4000名病人的统计分析预测总Hcy每升高5umol/L，心血管疾病的发生率会提高1.6倍，（95%的置信区间，男性比率为1.4-1.7倍，女性的比率为1.3-1.9倍），脑血管疾病的比率为1.3-1.9（95%的置信区间）。Hcy每升高5uno/L带来的风险与胆固醇升高0.5mmol/L(20mg/dL)大致相当，与外周动脉疾病也表现出很强的相关性。
Hcy的升高导致的同型半胱氨酸血症与心血管疾病风险的增加呈相关性。有许多公开的研究高半胱氨酸血症和心血管疾病关系的调查报道，一些心血管疾病患者最初都是健康的，最终发生了心血管事故，例如急性心肌梗死，中风，冠心病，或死亡。但是Cattaneo验证的11组相关病例对照研究的结果表明这种关系是不确定的，其中5组呈现相关性，6组是没有相关性的。近来，妇女健康研究部门进行了许多绝经后妇女Hcy的水平测试，122名后来患上心血管疾病的妇女血清样本与244名相同年龄的吸烟妇女（在3年的随访期间没有得病）的对照组进行了Hcy水平的测试，结果表明绝经后的妇女具有明显高的Hcy水平。高浓度的Hcy使得发生心血管疾病事故的几率增加了2倍。因此Hcy被认为是心血管疾病风险的独立危险因子。同时，Framingham心脏病研究团队提供的1933名老年人的Hcy水平数据也表明Hcy的水平与心血管疾病及其他病因导致的死亡有着直接的关系。
患有慢性肾脏病病人的发病率和死亡率超过了心血管疾病，这些病人血液中的Hcy经常被用于检测，由于这些病人缺乏Hcy代谢过程中的维生素，因此他们的Hcy水平由于血液流经肾脏被除去而减少了。近期的研究表明在流产或先天性缺陷的病人中Hcy的水平也是升高的，一些影响Hcy代谢的药物如甲氨蝶呤，卡马西平，苯妥英钠，氧化亚氮，和氮尿苷乙酯，会导致同型半胱氨酸水平升高。
反应原理
    首先把结合或聚合状态的Hcy（氧化型的Hcy）还原成游离型的Hcy，然后游离型的Hcy与丝氨酸在胱硫醚合成酶（CBS）的作用下形成胱硫醚，形成的胱硫醚在胱硫醚裂解酶（CBL）的作用下形成Hcy、丙酮酸和氨。丙酮酸与NADH（辅酶）在乳酸脱氢酶（LDH）的作用下反应，NADH转化为NAD+在340nm下每分钟转化的速率直接与Hcy的浓度正相关。
还原：包括复杂的二硫键的聚合状态的Hcy以及蛋白结合的Hcy样品在TCEP的作用下被还原为游离型的Hcy。
                
HCY-SS-HCY (dimerized homocysteine)               
R1-SS-HCY (R1 = thiol residue)                             HCY  
Protein-SS-HCY        
    酶反应：
 
试剂组分：
R1：NADH (0.47 mM), LDH (38 KU/L)，Serine (0.76 mM)，Tris缓冲液，< 1%. NaN3，2.9mM 的TCEP：2.9 mM
R2：CBS  0.748 KU/L； CBL  16.4 KU/L    < 1%NaN3
    校准：校准品1：（空白，0 umol/L的Hcy）和校准品2（28 umol/L的Hcy）
试剂准备：试剂开封即可直接使用，在瓶子标签所示的有效期内有效。试剂应为澄清状态，如果变浑浊应及时废弃。
校准品配置：校准品是通过重量法配置而得到的，可溯源至国际参考物质NIST SRM1955，SRM1955是通过HPLC方法学程序确定的。校准品会随试剂盒发货，打开即用，标示值可见标签上打印所示。
注意事项：
1、严格按照说明书操作，特别是处理方法和储存条件。
2、试剂1和试剂2含有NaN3，会和铜制、铅制水管形成极易爆炸的金属叠氮化物，在处理时应该用大量的水进行冲洗以避免NaN3的累积。
3、该试剂盒中所有有害物质成分的安全性清单可根据需要提供。
试剂的储存
1、有限期内应置于2-8℃储存，不要使用过期的试剂；
2、在有效期内试剂可反复使用，用完后请放回2-8℃；
3、禁止不同批次的试剂混用；
4、避免试剂的反复冻融；
5、上机使用时避免将试剂1和试剂2直接暴露于强光下使用；
6、避免试剂污染。
标本的采集与处理
1、收集的血清或经分离的血清、用装有EDTA钾盐的收集或是肝素锂收集管收集的血浆可用于Hcy的检测。尽管如此，给每个病人检测结果时应避免血清、肝素血清和EDTA血清之间的交叉互换。此外，血清和血浆分离管和等离子管之间的基质差异已被报道。为尽量减少由于红细胞合成导致的高同型半胱氨酸浓度的增加，标本的处理如下：
    标本采集后应置冰上并且快速处理，血清会慢慢结成块状并且体积会减少；
    在离心分离之前所有标本可以置于冰上最多6小时；
    从血清或血浆分离红细胞，离心后应转移至样品杯子或一个新的容器中。
    注意：样本没有及时置于冰上可能导致Hcy浓度增加10%-20%。
2、样本收集后2周内检测，可置于2-8℃保存；超过2周才被检测应置于-20℃；样本在-20℃可保留8个月。
3、选择正确的样本类型用于双试剂Hcy的检测是一个操作者应尽的责任；
4、检查所有的样品（标本，校准和控制）的气泡。分析前去除气泡；
5、含颗粒物的标本（纤维蛋白，红细胞，或其他物质）和明显的脂血标本不能用于测定，这些标本的结果可能是不准确的。
6、用低速涡流或温和倒置来混匀解冻后的样本，确保结果的一致性，避免反复冻融，标本中出现颗粒物、红细胞或混浊在应使用前应当离心处理。
7、机器上储存，EDTA血浆样本可在AU400上存放3小时，样本在其他的机型的存放没做测试。
提供的产品：Hcy试剂R1和R2，校准品和质控品。
仅用于体外诊断检测使用。
 
温馨提示：不可用于临床治疗。
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